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        實(shí)驗(yàn)室新手指南之DNA&RNA提取
      1. 發(fā)布日期:2017-12-22      瀏覽次數(shù):1381
        •  DNA 提取

          1. 取材料,加液氮研磨成粉末狀,迅速移入 1.5 ml Eppendorf 管中;
          2. 加入 800 μl 的 CTAB 提取緩沖液,混勻(CTAB 在 65℃水浴預(yù)熱),每5min輕輕震蕩幾次,20min后12000 r/min,離心15 min;
          3. 小心吸取上清液,加入等體積的酚:氯fang(各 400μl)溶液,混勻,4℃,12000 r/min,離心 10 min;
          4. 小心吸取上清液,加入等體積的氯fang,混勻,4℃,12000 r/min,離心 10 min;
          5. 重復(fù)步驟(4)1-2 次,以蛋白層不出現(xiàn)為止;
          6. 取上清,-20℃沉淀 1h,4℃,12000 r/min,離心 10 min;
          7. 棄去上清液,用 70%乙醇洗滌沉淀 2 次;
          8. 室溫下干燥后(一般干燥 5-15 min),溶于 30-50 μl DEPC 去離子水中,于-20℃或者-70℃下保存?zhèn)溆谩?/span>

          RNA 提取

          樣品處理:

          1. 培養(yǎng)細(xì)胞:收獲細(xì)胞 1-5×107,移入 1.5ml 離心管中,加入 1ml Trizol,混勻,室溫靜置 5min。
          2. 組織:取 50-100mg 組織(新鮮或-70℃及液氮中保存的組織均可)置 1.5ml 離心管中,加入 1ml Trizol 充分勻漿,室溫靜置5min。

          提取步驟:

          1. 加入 0.2ml 氯fang,振蕩 15s,靜置 2min。
          2. 4℃離心,12000g×15min,取上清。
          3. 加入 0.5ml 異丙醇,將管中液體輕輕混勻,室溫靜置 10min。
          4. 4℃離心,12000g×10min,棄上清。
          5. 加入 1ml 75%乙醇,輕輕洗滌沉淀。4℃,7500g×5min,棄上清。
          6. 晾干,加入適量的 DEPC H2O 溶解(65℃促溶 10-15min)。
        魏經(jīng)理
        • 手機(jī)

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